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Brainbitsllc常見問(wèn)題：
媒體
1. 混合 B27 補(bǔ)充劑 / Neurobasal 培養(yǎng)基 / 0.5 mM 谷氨酰胺后，培養(yǎng)基能穩(wěn)定多久？
我們?cè)?span> 4 o C 的黑暗中儲(chǔ)存長(zhǎng)達(dá) 6 個(gè)月。
2. 我需要多久補(bǔ)充一次 Neurobasal/B27/谷氨酰胺？
我們每 3 到 4 天更換 1/2 培養(yǎng)基，但這部分取決于細(xì)胞密度。參見 INVITROGEN (LTI) FOCUS 16:6。如果細(xì)胞密度高于 500/mm 2 ，則每 2 天更換 1/2。
3. 我可以用一些 B27/Neurobasal + 谷氨酰胺（無(wú)谷氨酸鹽）來(lái)稀釋 BrainBits 附帶的 B27/Neurobasal + 谷氨酰胺 + 谷氨酸鹽，比如 1:2 稀釋，細(xì)胞仍然生長(zhǎng)嗎？
是的，但也不是。請(qǐng)參閱上面引用的 FOCUS 文章。
4. 您通常在培養(yǎng)第 4 天之前向 Neurobasal/B27 添加 25 uM 谷氨酸鹽。谷氨酸的目的是什么？
它幫助海馬神經(jīng)元發(fā)芽并促進(jìn)活力。
5. 不加谷氨酸有問(wèn)題嗎？
在 4 DIV 時(shí)，您的存活率將降低約 30%。
6. 我需要一些培養(yǎng)基或試劑來(lái)維持培養(yǎng)物嗎？
您將需要您選擇的鍍膜玻璃或塑料基板。該訂單包括足夠的培養(yǎng)基來(lái)開始培養(yǎng)并維持 4 或 5 天。除此之外，您將需要更多培養(yǎng)基，我們可提供完整的即用型 NbActv1 配方，也可通過(guò) Invitrogen 單獨(dú)購(gòu)買。
7. 我應(yīng)該用抗生素/抗真菌劑補(bǔ)充 B27/Neurobasal 培養(yǎng)基嗎？例如：pen/strep/fungizone 或慶大霉素？
我們通常在不使用抗菌抗生素和抗真菌劑的情況下進(jìn)行培養(yǎng)，并取得了良好的效果。這具有三個(gè)優(yōu)點(diǎn)：
首先，當(dāng)出現(xiàn)污染時(shí)，更容易確定污染源。其次，如果您使用抗生素，當(dāng)您感染時(shí)，就更難擺脫。第三，抗生素已被證明可以激活神經(jīng)元中的癲癇樣爆發(fā)活動(dòng)。然而，我們有時(shí)會(huì)在慶大霉素 (10 ug/ml) 中開始培養(yǎng)，并在細(xì)胞粘附后一小時(shí)后將其沖洗干凈。
休眠®
*Hibernate、Neurobasal 和 B27 僅用于研究目的，由 Invitrogen Corporation 制造。Hibernate、Neurobasal 和 B27 是 Invitrogen Corporation 的商標(biāo)。
1. 我可以使用 Hibernate 進(jìn)行木瓜蛋白酶治療嗎？
BrainBits LLC 提供 5 ml 不含 B27 的 Hibernate-Ca，用于在 15 ml 無(wú)菌離心管中最佳分離 BrainBits 與木瓜蛋白酶。加入木瓜蛋白酶 (Worthington) 后，在 37 o C 下溶解10 分鐘。您需要使用 0.2 µm 過(guò)濾器對(duì)溶液進(jìn)行消毒。
2. 你是否總是在 Hibernate 中添加 B27 谷氨酰胺，或者它是否仍然在 Hibernate 中保持細(xì)胞存活？
幾乎總是。請(qǐng)參見 Brewer and Price (1996) PM:8856709 的圖 1 在 37 0 C 環(huán)境 CO2 中，Neurobasal/B27/gln 中的 LD50 為 24 小時(shí)，休眠/B27/gln 中為 >3 天。
3. 我們可以提供不含葡萄糖和丙酮酸的 Hibernate 嗎？
是的，事實(shí)上我們有幾個(gè)客戶提出了這個(gè)要求。因此，我們可以以相同的價(jià)格提供不含葡萄糖和丙酮酸的 Hibernate A。您只需要告訴我們您是希望用 NaCl 將滲透壓調(diào)整到正常水平還是低于平常水平，以便您可以自行調(diào)整。
4. Hibernate 的其他用途包括：
轉(zhuǎn)基因小鼠基因分型過(guò)程中的大腦儲(chǔ)存
將腦組織運(yùn)送給合作者
基質(zhì)
1. 我不經(jīng)常使用聚-D-賴氨酸。我制作了 5 毫克/毫升的 (100x) 儲(chǔ)備溶液并將其等分到小冷凍管中。我可以將原液冷凍保存多久，并且仍然可以與海馬細(xì)胞一起使用？
大概是永遠(yuǎn)。不要儲(chǔ)存在聚丙烯管中。聚苯乙烯或 PET 更好。解凍時(shí)一定要攪拌均勻。
2. 一些研究人員使用聚乙烯亞胺代替聚賴氨酸。一個(gè)比另一個(gè)有優(yōu)勢(shì)嗎？
PEI 比聚賴氨酸便宜。我們使用 PEI 并沒有取得多大成功，但 Mark Mattson 在開始在 Neurobasal/10% 血清中培養(yǎng)后一直使用它。報(bào)告表明神經(jīng)元存活率或尖峰率沒有顯著差異。
Soussou WV、Yoon GJ、Brinton RD、Berger TW (2007) 在表面處理的多電極陣列上培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元的神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)形態(tài)和電生理學(xué)。IEEE 跨生物醫(yī)學(xué)工程 54：1309-1320。 電話：17605362
Brewer GJ, Cotman CW (1989) 海馬神經(jīng)元在低密度限定培養(yǎng)基中的存活和生長(zhǎng)：夾心培養(yǎng)技術(shù)或低氧的優(yōu)勢(shì)。大腦研究 494:65-74。電話：2765923
3. BrainBits 神經(jīng)元越來(lái)越多地生長(zhǎng)為細(xì)胞簇或團(tuán)塊，而不是孤立的。怎么了？
這意味著細(xì)胞與自身的粘附比與基底更緊密。最可能的問(wèn)題是基材準(zhǔn)備不充分。將您的方案與推薦的聚賴氨酸制備和基材涂層進(jìn)行比較。
4. 關(guān)于聚-L-賴氨酸與聚-D-賴氨酸，我假設(shè)使用聚-D-賴氨酸，因?yàn)槿绻纸獬少嚢彼幔?xì)胞就不能使用d賴氨酸。有什么道理嗎？
這就是理論。在一些早期研究 (Brain Res. 494:65(1989)) 中，我們發(fā)現(xiàn)差別不大。
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